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多克隆抗體制備關(guān)于抗體的鑒定說明

更新時間:2020-05-28點擊次數(shù):1577
   多克隆抗體制備一般包括以下幾個步驟:
  1.制備抗原;
  2.選擇實驗動物;
  3.動物免疫;
  4.試取血進(jìn)行測試,看看是否成功免疫;
  5.如果成功免疫,殺死實驗動物,將血清全部采集;
  6.純化出抗體;
  7.鑒定抗體,包括純度以及特異性。
  多克隆抗體制備的抗體鑒定說明:
  1.抗體的效價鑒定
  不管是用于診斷還是用于治療,制備抗體的目的都是要求較高效價。不同的抗原制備的抗體,要求的效價不一。鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應(yīng)、瓊脂擴(kuò)散試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗來鑒定。
  2.抗體的特異性鑒定
  抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力??贵w的特異性高,它的識別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示。交叉反應(yīng)率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時的濃度,并按相關(guān)公式計算交叉反應(yīng)率。如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時,表示這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為0,即該血清的特異性較好。
  抗體的親和力是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結(jié)合位點與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵、疏水鍵、側(cè)鏈相反電荷基因的庫侖力、范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示,K的單位是L/mol,通常K的范圍在108-1010/mol,也有多達(dá)1014/mol。抗體親和力的測定對抗體的篩選,確定抗體的用途,驗證抗體的均一性等均有重要意義。
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